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ELISA檢測(cè)試驗(yàn)雙抗體夾心法和競爭法比較
點(diǎn)擊次數(shù):942 更新時(shí)間:2024-12-17

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassayELISA指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒(ELISAKits)已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具,是檢測(cè)組織提取液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具,也是重要的質(zhì)量控制手段。

ELISA檢測(cè)試驗(yàn)雙抗體夾心法和競爭法有以下幾個(gè)方面的比較:

原理:

雙抗體夾心法:利用兩種針對(duì)抗原不同表位的特異性抗體,一種包被在固相載體上捕獲抗原,另一種用酶標(biāo)記用于檢測(cè)被捕獲的抗原,形成“固相抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。ELISA檢測(cè)試驗(yàn)雙抗體夾心法和競爭法比較

競爭 ELISA 法:分為直接競爭法和間接競爭法。直接競爭法是將酶標(biāo)記的抗原和待檢測(cè)的未標(biāo)記抗原競爭結(jié)合固相抗體;間接競爭法是將未標(biāo)記抗原和固相抗原競爭結(jié)合待檢測(cè)的抗體,然后用酶標(biāo)二抗檢測(cè)結(jié)合的抗體。

ELISA檢測(cè)試驗(yàn)雙抗體夾心法和競爭法比較

檢測(cè)對(duì)象:

雙抗體夾心法:主要用于檢測(cè)大分子抗原。

競爭 ELISA 法:直接競爭法適合檢測(cè)小分子半抗原,間接競爭法適合檢測(cè)抗體。

標(biāo)準(zhǔn)曲線:

雙抗體夾心法:標(biāo)準(zhǔn)曲線通常為S"型,隨著抗原濃度增加,吸光度值上升。

競爭 ELISA 法:標(biāo)準(zhǔn)曲線通常為“反 S"型,隨著待測(cè)物濃度增加,吸光度值下降。

靈敏度:

雙抗體夾心法:靈敏度較高,尤其對(duì)于含量較低的抗原。

競爭 ELISA 法:直接競爭法對(duì)小分子檢測(cè)的靈敏度較高。

特異性:

雙抗體夾心法:特異性較高,需要兩種抗體與抗原的特異性結(jié)合。

競爭 ELISA 法:特異性相對(duì)略低,尤其在競爭不全的情況下。

操作復(fù)雜性:

雙抗體夾心法:步驟相對(duì)較多,操作較復(fù)雜。·

競爭 ELISA 法:操作相對(duì)簡單。

應(yīng)用場景:

雙抗體夾心法:常用于生物醫(yī)學(xué)中蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等大分子物質(zhì)的檢測(cè)。

競爭 ELISA 法:常用于藥物殘留、激素等小分子物質(zhì)的檢測(cè)。



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