欧美亚洲精品一区二三区,免费人成视频在线观看网站,秋霞鲁丝片无码一区二区,青青草97国产精品免费观看

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > 論述PCR反應(yīng)條件的控制
論述PCR反應(yīng)條件的控制
點(diǎn)擊次數(shù):1374 更新時(shí)間:2022-06-28
        PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。
  溫度與時(shí)間的設(shè)置:基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法,雙鏈DNA在90~95℃變性,再迅速冷卻至40 ~60℃,引物退火并結(jié)合到靶序列上,然后快速升溫至70~75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100~300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法,除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一,一般采用94℃變性,65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性)。PCR反應(yīng)條件的控制如下:
1.  PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子 。
2.  鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高,常用1.5 mmol/L。
3.  底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制,20~200 umol/L。
4.  TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul)。 
5.  引物 濃度一般為0.1 ~0.5 umol/L。 
6.  反應(yīng)溫度
(1)變性溫度和時(shí)間95℃,30 s。
(2)退火溫度和時(shí)間 低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃。
(3)延伸溫度和時(shí)間72℃,1 min/kb(10 kb內(nèi))。
(4)Tm值=4(G+C) +2(A+T)。

7.  循環(huán)次數(shù) 

一般為25 ~30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴(kuò)增的產(chǎn)量。模板初始濃度低,可增加循環(huán)數(shù)以便達(dá)到有效的 擴(kuò)增量。但循環(huán)數(shù)并不是可以無(wú)限增加的。一般循環(huán)數(shù)為30個(gè)左右,循環(huán)數(shù)超過(guò)30個(gè)以后,DNA聚合酶活性逐漸達(dá)到飽和,產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加,出現(xiàn)了所謂的“平臺(tái)期"。


我的公把我弄高潮了视频| 亚洲不卡无码永久在线观看| 人妻丰满熟AV无码区HD| 超碰97人人做人人爱少妇 | 国产男女av| 一区二区三区www污污污网站| 国产乱码久久久久久| 97久久久精品综合88久久| 久久久久久久久久久久中文字幕| 亚洲男人AV天堂午夜在| 欧美国产成人精品二区| 国产成人精品999视频| 新民市| 性熟妇videos另类hd| 极品色| 三级大黄片| 国产精品无码专区久久久| 双性人妻的yin荡生活| 久久精品国产精品亚洲下载| 一本一道AV无码中文字幕| 色九月亚洲综合网| 一区二区免费高清观看国产丝瓜| 99无人区码一码二码三| 婷婷久久香蕉五月综合| 蜜桃在线视频| 一本色道久久综合亚洲精品图片 | 国产三级视频网站| 丰满少妇人妻HD高清大乳在线| 亚洲乱码一卡二卡卡3卡4卡| 欧美牲交videossexeso欧美| 亚洲精品你懂的在线观看| 国偷自产Av一区二区三区蜜桃| 日韩欧美亚洲综合久久影院| 亚洲国产精品日韩专区AV| 亚洲av永久无码天堂网| 特级BBBBBBBBB视频| 一色桃子av| 日韩老熟妇| 香蕉视频一直看一直爽| www.精品| 亚洲午夜在线|